Khảo sát điều kiện phản ứng polymerase spiral reaction trong việc phát hiện nhanh gen kháng methicillin của Staphylococcus aureus

Abstract

Staphylococcus aureus (S. aureus) là một trong những vi khuẩn gây bệnh nguy hiểm cho người và vật nuôi, đặc biệt là khi chúng kháng lại kháng sinh methicillin. Do đó, việc phát hiện các dòng S. aureus kháng kháng sinh methicillin (MRSA) rất quan trọng trong việc lựa chọn kháng sinh phù hợp để điều trị. Trong đó, trình tự gen mecA quy định một trong những tổ hợp kháng methicillin của MRSA được sử dụng làm dấu ấn sinh học cho các kĩ thuật sinh học phân tử. Nghiên cứu dựa trên phản ứng trùng hợp vòng xoắn - Polymerase spiral reaction (PSR) với mục đích khuếch đại đoạn gen mecA trong điều kiện đẳng nhiệt và không yêu cầu trang thiết bị đắt tiền. Do vậy, mục tiêu của nghiên cứu này là khảo sát điều kiện phản ứng PSR nhằm phát hiện nhanh gen mecA trên MRSA. Kết quả đã xác định được điều kiện tối ưu của phản ứng PSR là nhiệt độ 65 ⁰C trong 50 phút, với nồng độ tối ưu của mồi F1+Nr/R1+N là 1,6 µM và nồng độ tối ưu của mồi F2/R2 là 0,1 µM. Trong đó, giới hạn phát hiện của phản ứng PSR đối với DNA tách chiết là 10^-3 ng/μL và đối với tế bào vi khuẩn là 5 tế bào/μL.