Xây dựng phương pháp phát hiện nhanh tại thực địa giống lúa Khang Dân 18 chỉnh sửa gen bằng kỹ thuật RPA

Abstract

Nghiên cứu được thực hiện nhằm ứng dụng kỹ thuật khuếch đại đẳng nhiệt để phát hiện nhanh giống lúa Khang Dân 18  chỉnh sửa gen trực tiếp từ mẫu lá, từ đó phát triển thành bộ kit có thể sử dụng tại thực địa. Giống lúa Khang Dân 18 đột biến và mất đoạn gen OsDSG1 được xử lý nhanh bằng các phương pháp khác nhau để thu nhận DNA nhằm sử dụng cho phản ứng RPA với cặp mồi đặc hiệu. Phương pháp xử lý bằng SDS kết hợp với tinh sạch nhanh bằng hỗn hợp phenol/chloroform/isoamyl alcohol theo tỉ lệ 25:24:1 phù hợp để thu nhận DNA cho phản ứng RPA. Việc tối ưu quy trình xử lý mẫu cho thấy, khi ủ mẫu lá lúa đã nghiền nhỏ với dung dịch SDS nồng độ 20 % ở 65 °C trong 15 phút, sau tinh sạch nhanh có thể thực hiện phản ứng RPA ở nhiệt độ cố định 37 °C trong 20 phút. Phản ứng RPA sau khi thực hiện, có thể đọc kết quả trực tiếp bằng mắt thường thông qua phản ứng màu với Erichrome Black T. Nghiên cứu tạo tiền đề để có thể phát triển giống lúa đã chỉnh sửa gen, có thể thực hiện trực tiếp ngoài đồng ruộng.