Đánh giá hiệu quả sử dụng dịch ly giải tế bào Escherichia coli biểu hiện enzyme Bst DNA polymerase dùng cho phản ứng LAMP

Abstract

Bst DNA polymerase Large Fragment (BstLF) là enzyme giữ vai trò tổng hợp mạch mới trong các phản ứng khuếch đại đẳng nhiệt trung gian vòng lặp (LAMP). Hiện nay, BstLF thương mại sử dụng cho LAMP có giá thành cao, trong khi BstLF tự sản xuất cần quy trình tinh sạch phức tạp và khó giữ được hoạt tính lâu dài. Do đó, nghiên cứu này phát triển phương pháp nhằm đơn giản hóa quy trình bằng cách biểu hiện BstLF trong Escherichia coli BL21(DE3) và sử dụng trực tiếp dịch ly giải tế bào thay vì tinh sạch enzyme. E. coli BL21(DE3) được cảm ứng biểu hiện BstLF bằng IPTG 0,05 mM ở 37 °C trong 4 giờ, sau đó thu tế bào và ly giải ở 65 °C trong vòng 30 phút. Dịch ly giải từ 6 × 10¹¹ tế bào được bổ sung trực tiếp vào phản ứng LAMP và có thể phát hiện tối thiểu 10³ fg DNA hệ gen của các vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus và Salmonella enterica. Nghiên cứu này đã chứng minh việc sử dụng dịch ly giải tế bào E. coli BL21(DE3)/BstLF hoàn toàn có thể thay thế cho BstLF tinh sạch trong phản ứng LAMP, cung cấp nguồn sinh phẩm giá rẻ phù hợp cho các ứng dụng nghiên cứu và đào tạo.