Phát hiện nhanh Clostridium perfringens bằng kĩ thuật RPA (recombinase polymerase amplification) khuếch đại acid nucleic đẳng nhiệt

Abstract

Clostridium perfringens được xem là một trong những tác nhân gây ngộ độc thực phẩm phổ biến nhất chỉ sau Salmonella. C. perfringens là trực khuẩn yếm khí, Gram dương có nhiều trong đất, ruột động vật, có thể nhiễm vào các loại thịt, đặc biệt là thực phẩm đông lạnh, gây ngộ độc cho người với các triệu chứng đau bụng và tiêu chảy. Để phát hiện vi khuẩn gây bệnh này, các phương pháp phân lập, nuôi cấy, sinh hóa thông thường cũng như kĩ thuật PCR được thực hiện theo các quy trình phức tạp, tốn nhiều thời gian. Và cũng cần kĩ thuật viên có kinh nghiệm, máy luân nhiệt chuyên dụng đắt tiền. Nghiên cứu này ứng dụng kĩ thuật RPA (recombinase polymerase amplification) khuếch đại acid nucleic đẳng nhiệt để phát hiện nhanh Clostridium perfringens. RPA có thời gian phản ứng nhân bản DNA đích ngắn, thực hiện chỉ tại một nhiệt độ, đạt được độ nhạy và độ đặc hiệu cao. Kết quả đã xác lập được một quy trình phát hiện chính xác đặc trưng của C. perfringens trong thời gian 25 phút tại nhiệt độ 38 ⁰C, nhạy hơn 10 lần so với kĩ thuật PCR, tạo tiền đề cho việc phát hiện trực tiếp C. perfringens trên các loại mẫu thực phẩm.