Tạo dòng gene mã hóa enzyme Sphingosine 1-phosphate Lyase ở người (SGPL1)

Abstract

Sphingosine 1-phosphate (S1P) là phân tử lipid có hoạt tính sinh học quan trọng trong tế bào và cơ thể như điều khiển phân bào, vận động của các tế bào miễn dịch và điều hòa sinh mạch. S1P lyase là enzyme phân giải sphingosine 1-phosphate (S1P) bằng cách cắt chuỗi acyl ở vị trí carbon số 2 và 3, để tạo thành hexdecenal và ethanolamin phosphate, vì thế enzyme này là một trong những yếu tố tham gia điều hòa lượng S1P trong tế bào và cơ thể. Trong tế bào động vật, SGPL1 còn phân hủy một cơ chất khác là dihydro-S1P (dhS1P), một đồng phân no của S1P được tạo ra trong quá trình tổng hợp mới sphingolipid khởi đầu bằng quá trình cô đông hóa serin và palmitoyl-CoA. Đến nay, dhS1P và S1P vẫn được sử dụng thay thế cho nhau với giả định cả hai cơ chất này đều đáp ứng hoàn toàn như nhau với hoạt tính enzyme của SGPL1. Mặc dù vậy, hai cơ chất này thể hiện nhiều vai trò sinh học trái ngược nhau và đáp ứng khác nhau với các tác nhân môi trường và thuốc điều trị ung thư. Để tìm câu trả lời chính xác cho mức độ đặc hiệu của SPGL1 lên hai cơ chất kể trên, chúng tôi tiến hành tạo dòng trình tự mã hóa cho SGPL1 của người vào trong hệ thống biểu hiện vi khuẩn, vector pQ60. Vector tái tổ hợp mang hSGPL1 này sẽ cung cấp nguyên liệu để biểu hiện và tinh sạch enzyme SGPL1 phục vụ cho các nghiên cứu hoạt tính và động học enzyme lên hai cơ chất dhS1P và S1P trong tương lai.